BspQI
BspQI, belirli bölgeleri tanıyabilen ve belirli koşullar altında üretilen E. coli'de rekombinant olarak ifade edilebilir.
Bir IIs kısıtlama endonükleaz kısıtlama endonükleazı olan BspQI, Bacillus sphaericus'tan klonlanmış ve değiştirilmiş BspQI genini taşıyan bir rekombinant E. coli türünden türetilir.Belirli bölgeleri tanıyabilir ve tanıma sırası ve bölünme bölgeleri aşağıdaki gibidir:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Ürün Özellikleri
1. Yüksek aktivite, Hızlı sindirim;
2. "Neşter" gibi hassas kesim sağlayan düşük yıldız aktivitesi;
3. BSA içermeyen ve hayvansal kökenli olmayan;
Metilasyon Hassasiyeti
Dmetilasyonum:Hassas Değil;
Dcm metilasyonu:Hassas Değil;
CpG Metilasyonu:Hassas Değil;
Depolama koşulları
Ürün ≤ 0°C sıcaklıkta gönderilmelidir;-25~- 15°C koşulunda saklayın.
Depolama arabelleği
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiyotreitol, 500 µg/ml Rekombinant Albümin, %0,1 Trition X-100 ve %50 gliserol (pH 7,0 @ 25°C).
Birim Tanımı
Bir birim, toplam 50 µL reaksiyon hacminde 50°C'de 1 saatte 1 µg Dahili kontrol DNA'sını sindirmek için gereken enzim miktarı olarak tanımlanır.
Kalite kontrol
Protein Saflık Testi (SDS-PAGE):BspQI'nin saflığı SDS-PAGE analiziyle ≥%95 olarak belirlendi.
RNaz:50°C'de 4 saat boyunca 1,6μg MS2 RNA ile 10U BspQI, agaroz jel elektroforezi ile belirlendiği üzere herhangi bir bozulma sağlamaz.
Spesifik Olmayan DNaz Aktivitesi:16 saat süreyle 50°C'de 1μg λ DNA içeren 10U BspQI, 1 saat süreyle 50°C'ye kıyasla, agaroz jel elektroforezi ile belirlendiği gibi fazla DNA üretmez.
Ligasyon ve Yeniden Kesim:1 μg λDNA'nın 10U BspQI ile sindiriminden sonra, DNA fragmanları 16°C'de T4 DNA ligaz ile bağlanabilir.Ve bu bağlanan parçalar BspQI ile yeniden kesilebilir.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA'ya özgü TaqMan qPCR tespiti, E.coli genom kalıntısının ≤ 0,1 pg/ul olduğunu gösterdi.
Konakçı protein kalıntısı:≤ 50 ppm
Bakteriyel Endotoksin: LAL testi, Çin Farmakopesi IV 2020 baskısına göre, jel limit test yöntemi, genel kural (1143).Bakteriyel endotoksin içeriği ≤10 EU/mg olmalıdır.
Reaksiyon sistemi ve koşulları
| Bileşen | Hacim |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Tamponu | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL'ye kadar |
Reaksiyon koşulları: 50°C, 1~ 16 saat.
Isı ile inaktivasyon: 20 dakika boyunca 80°C.
Önerilen reaksiyon sistemi ve koşulları, yalnızca referans amaçlı olan nispeten iyi enzim sindirimi etkisi sağlayabilir; ayrıntılar için lütfen deney sonuçlarına bakın.
Ürün uygulaması
Kısıtlama endonükleaz sindirimi, Hızlı klonlama.
Notlar
1. Enzim hacmi reaksiyon hacminin ≤ 1/10'u.
2. Gliserol konsantrasyonu %5'ten fazla olduğunda yıldız aktivitesi meydana gelebilir.
3. Substrat önerilen oranın altına düştüğünde bölünme aktivitesi meydana gelebilir.
