Proteinaz K (Liyofilize toz)
Kat No: HC4500A
Proteinaz K, geniş substrat spesifikliğine sahip stabil bir serin proteazdır.Deterjanların varlığında bile doğal haldeki birçok proteini bozar.Kristal ve moleküler yapı çalışmalarından elde edilen kanıtlar, enzimin aktif bölge katalitik üçlüsüne (Asp) sahip subtilisin ailesine ait olduğunu göstermektedir.39-Onun69- Ser224).Baskın bölünme bölgesi, bloke edilmiş alfa amino gruplarına sahip alifatik ve aromatik amino asitlerin karboksil grubuna bitişik peptit bağıdır.Geniş olması nedeniyle yaygın olarak kullanılır.özgüllük.
Depolama koşulları
2-8°C kısa süreli depolama, -25~-15°C uzun süreli depolama.Kuru toz durumu -25~-15°C 3 yıl süreyle geçerlidir;enzim tozu uygun hacimde çözülmelidir.
Şartname
| Dış görünüş | Beyaz ila kirli beyaz amorf liyofilize toz |
| Aktivite | ≥30 U/mg |
| DNaz | Hiçbiri algılanmadı |
| RNaz | Hiçbiri algılanmadı |
Özellikler
| EC numarası | 3.4.21.64 (Tritirachium albümünden rekombinant) |
| Moleküler ağırlık | 29 kDa (SDS-sayfa) |
| İzoelektrik nokta | 7.81 |
| Optimum pH | 7.0-12.0 Şekil.1 |
| Optimum sıcaklık | 65°C Şekil 2 |
| pH stabilitesi | pH 4,5-12,5 (25°C, 16 saat) Şekil 3 |
| Termal kararlılık | 50°C'nin altında (pH 8,0, 30 dakika) Şekil 4 |
| Aktivatörler | SDS, üre |
| İnhibitörler | Diizopropil florofosfat;fenilmetilsülfonil florür |
Uygulamalar
1. Genetik tanı kiti
2. RNA ve DNA ekstraksiyon kitleri
3. Protein olmayan bileşenlerin dokulardan ekstraksiyonu, protein safsızlıklarının parçalanması, örneğin DNA aşıları ve heparinin hazırlanması
4. Darbeli elektroforez ile kromozom DNA'sının hazırlanması
5. Batı lekesi
6. Enzimatik glikosile edilmiş albümin reaktifleri in vitro tanı
Önlemler
Kullanırken veya tartarken koruyucu eldiven ve gözlük takın ve kullanımdan sonra iyice havalandırın.Bu ürün ciltte alerjik reaksiyonlara ve ciddi göz tahrişine neden olabilir.Solunması halinde alerjiye, astım semptomlarına veya nefes darlığına neden olabilir.Solunum yolu tahrişine neden olabilir.
tahlil
Birim tanımı
Bir birim (U), aşağıdaki koşullar altında dakikada 1 μmol tirozin üretmek üzere kazeini hidrolize etmek için gereken enzim miktarı olarak tanımlanır.
Reaktiflerin hazırlanması
Reaktif I: 1 g süt kazeini, 50 ml 0,1 M sodyum fosfat çözeltisi (pH 8,0) içinde çözüldü, 65-70°C suda 15 dakika inkübe edildi, karıştırıldı ve çözüldü, su ile soğutuldu, sodyum hidroksit ile pH 8,0'a ayarlandı ve sabit hacim 100ml.
Reaktif II: 0,1M trikloroasetik asit, 0,2M sodyum asetat, 0,3M asetik asit.
Reaktif III: 0,4M Na2CO3çözüm.
Reaktif IV: Forint reaktifi saf su ile 5 kez seyreltilir.
Reaktif V: enzim seyreltici: 0,1 M sodyum fosfat çözeltisi (pH 8,0).
Reaktif VI: tirozin çözeltisi: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tirozin, 0,2M HCL ile çözündürüldü.
Prosedür
1. 0,5 ml reaktif I, 37°C'ye önceden ısıtılır, 0,5 ml enzim çözeltisi eklenir, iyice karıştırılır ve 37°C'de 10 dakika inkübe edilir.
2. Reaksiyonu durdurmak için 1 ml reaktif II ekleyin, iyice karıştırın ve 30 dakika boyunca inkübasyona devam edin.
3. Reaksiyon solüsyonunu santrifüjleyin.
4. 0,5 ml süpernatan alın, 2,5 ml reaktif III, 0,5 ml reaktif IV ekleyin, iyice karıştırın ve 37°C'de 30 dakika inkübe edin.
5. OD660OD olarak belirlendi1;boş kontrol grubu: OD'yi belirlemek için enzim çözeltisini değiştirmek için 0,5 ml reaktif V kullanılır660OD olarak2, ΔOD=OD1-OD2.
6. L-tirozin standart eğrisi: 0,5 mL farklı konsantrasyonda L tirozin çözeltisi, 2,5 mL Reaktif III, 5 mL santrifüj tüpünde 0,5 mL Reaktif IV, 30 dakika boyunca 37°C'de inkübe edin, OD'yi tespit edin660farklı L-tirozin konsantrasyonu için, daha sonra Y=kX+b standart eğrisi elde edildi; burada Y, L-tirozin konsantrasyonu, X, OD'dir.600.
Hesaplama
2: Reaksiyon çözeltisinin toplam hacmi (mL)
0,5: Enzim çözeltisinin hacmi (mL)
0,5: Kromojenik belirlemede kullanılan reaksiyon sıvısı hacmi (mL)
10: Reaksiyon süresi (dak)
Df: Çoklu seyreltme
C: Enzim konsantrasyonu (mg/mL)
Referanslar
1. Wieger U ve Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U ve Hilz H. Biochem.Biyofiz.Res.İletişim(1971);44:513.
3. Hilz, H.ve diğerleri,Avro.J. Biochem.(1975);56:103–108.
4.Sambrook Jet al., Moleküler Klonlama: Bir Laboratuvar El Kitabı, 2. baskı, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Şekil 2 Optimum sıcaklık
20 mM K-fosfat tamponu pH 8,0'da reaksiyon.Enzim konsantrasyonu: 1 mg/mL
Şekil 3 pH istikrar
25°C, 50 mM tampon çözeltisi ile 16 saatlik işlem: pH 4,5-5,5, Asetat;pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCL.pH 9,0-12,5, Glisin-NaOH.Enzim konsantrasyonu: 1 mg/mL
Şekil 4 Termal istikrar
50 mM Tris-HCL tamponu, pH 8,0 ile 30 dakikalık tedavi.Enzim konsantrasyonu: 1 mg/mL
Şekil 5 Depolama stabilty at 25°C
