Bst 2.0 DNA Polimeraz (Gliserol içermez)
Bst DNA polimeraz V2, 5'→3' DNA polimeraz aktivitesine ve güçlü zincir değiştirme aktivitesine sahip olan ancak 5'→3' eksonükleaz aktivitesi olmayan Bacillus stearothermophilus DNA Polimeraz I'den türetilir.Bst DNA Polimeraz V2, iplik yer değiştirmesi, izotermal amplifikasyon LAMP (Döngü aracılı izotermal amplifikasyon) ve hızlı sıralama için idealdir.
Bileşenler
| Bileşen | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraz V2(Gliserol içermez)(8U/μL) | 0,2 mL | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Tampon | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 2×10 ml |
Uygulamalar
1.LAMP izotermal amplifikasyonu
2.DNA zinciri tek yer değiştirme reaksiyonu
3.Yüksek GC gen dizilimi
4.Nanogram seviyesinin DNA dizilimi.
Saklama Durumu
0°C'nin altında nakliye ve -25°C~-15°C'de saklanmalıdır.
Birim Tanımı
Bir birim, 65°C'de 30 dakika içinde asitte çözünmeyen malzemeye 25 nmol dNTP katan enzim miktarı olarak tanımlanır.
Kalite kontrol
1.Protein Saflık Testi (SDS-PAGE):Bst DNA polimeraz V2'nin saflığı, Coomassie Blue tespiti kullanılarak SDS-PAGE analizi ile belirlenen ≥%99'dur.
2.Eksonükleaz Aktivitesi:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1 μg λ -HindⅢ sindirim DNA'sı ile 37°C'de 16 saat boyunca inkübasyonu, belirlendiği gibi tespit edilebilir bir bozulmayla sonuçlanmaz.
3.Nickaz Aktivitesi:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1 μg pBR322 DNA ile 16 saat boyunca 37°C'de inkübasyonu, belirlendiği gibi herhangi bir saptanabilir bozunmayla sonuçlanmaz.
4.RNaz Aktivitesi:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1,6 μg MS2 RNA ile 37°C'de 16 saat süreyle inkübasyonu, belirlendiği gibi tespit edilebilir bir bozulmayla sonuçlanmaz.
5.E. coli DNA'sı:120 U Bst DNA polimeraz V2, E. coli 16S rRNA lokusuna spesifik primerlerle TaqMan qPCR kullanılarak E. coli genomik DNA'sının varlığı açısından taranır.E. coli genomik DNA kontaminasyonu ≤1 Kopyadır.
LAMBA Reaksiyonu
| Bileşenler | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Tampon | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP'ler (her biri 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Yeşil (25×)a | 1,0 μL |
| Astar karışımıb | 6 μL |
| Bst DNA Polimeraz V2 (Gliserolsüz) (8 U/uL) | 1 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL'ye kadar |
Notlar:
1 A.SYTOTM 16 Yeşil (25×): Deneysel ihtiyaçlara göre diğer boyalar ikame olarak kullanılabilir;
2)b.Primer karışımı: 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB ve diğer hacimlerin karıştırılmasıyla elde edilir.
Reaksiyon ve Durum
1 × HC Bst V2 Tamponu, inkübasyon sıcaklığı 60°C ila 65°C arasındadır.
Isı İnaktivasyonu
80 °C, 20 dakika
