CHO HCP ELISA Kiti
Bu tahlilde Tek adımlı immünosorbent ELISA yöntemi kullanılır.CHOK1 HCP içeren numuneler aynı anda HRP etiketli keçi anti-CHOK1 antikoru ve ELISA plakası üzerinde kaplanmış anti-CHOK1 antikoru ile reaksiyona girer ve sonunda katı fazlı antikor-HCP etiketli antikordan oluşan bir sandviç kompleksi oluşturur.Bağlanmamış antijen-antikor, ELISA plakasının yıkanmasıyla çıkarılabilir.Yeterli reaksiyon için kuyucuğa TMB substratı eklenir.Durdurma çözeltisinin eklenmesinden sonra renk gelişimi durdurulur ve reaksiyon çözeltisinin 450/650 nm'deki OD veya absorbans değeri bir mikroplaka okuyucuyla okunur.OD değeri veya absorbans değeri çözeltideki HCP içeriğiyle orantılıdır.Buradan çözeltideki HCP konsantrasyonu standart eğriye göre hesaplanabilir.
Başvuru
Bu kit, numunelerdeki CHOK1 konakçı hücre proteini kalıntılarının içeriğini kantitatif olarak tespit etmek için kullanılır.
Cbileşenler
| G/G | Bileşen | Konsantrasyon | Depolama koşulları |
| 1 | CHOK1 HCP Standardı | 0,5 mg/mL | ≤–20°C |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/mL | ≤–20°C, ışıktan koruyun |
| 3 | TMB | NA | 2-8°C, ışıktan koruyun |
| 4 | 20 × PBST%0,05 | NA | 2-8°C |
| 5 | Çözümü durdur | NA | RT |
| 6 | Mikroplak kapatıcılar | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8°C |
| 8 | Yüksek adsorpsiyonlu ön kaplama Plakaları | NA | 2-8°C |
Gerekli Ekipman
| Sarf Malzemeleri / Ekipman | imalat | Katalog |
| Mikroplaka okuyucu | Moleküler Cihazlar | Spectra Max M5, M5e veya eşdeğeri |
| Termomikser | Eppendorf | Eppendorf/5355 veya eşdeğeri |
| Girdap karıştırıcı | IKA | MS3 Digital veya eşdeğeri |
Depolama ve stabilite
1.-25~-15°C'de taşıma.
2.Saklama koşulları Tablo 1'de gösterildiği gibidir;bileşenler 1-2 ≤–20°C'de saklanır,5-6 oda sıcaklığında saklanır,3、4、7、8 2-8°C'de saklanır;geçerlilik süresi 12 aydır.
Ürün parametreleri
1.Hassasiyet: 1ng/mL
2.Algılama aralığı:3- 100ng/mL
3.Hassasiyet: Test içi CV≤ %10, testler arası CV≤ %15
4.HCP kapsamı: >%80
5.Özgünlük: Bu kit, saflaştırma işleminden bağımsız olarak CHOK1 HCP ile spesifik olarak reaksiyona girdiği için evrenseldir.
Reaktif hazırlama
1.PBST'nin %0,05'i
GKH ile seyreltilmiş 15 ml 20×PBST %0,05 alın2O ve 300 ml'ye tamamlandı.
2.%1,0 BSA
Şişeden 1 g BSA alın ve 100 ml %0,05 PBST ile seyreltin, tamamen eriyene kadar iyice karıştırın ve 2-8°C'de saklayın.Hazırlanan seyreltme tamponu 7 gün süreyle geçerlidir.Gerektikçe hazırlanması tavsiye edilir.
3.Tespit çözümü 2μg/mL
48μL 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP alın ve 2μg/mL saptama solüsyonunun nihai konsantrasyonunu elde etmek için 11.952μL %1 BSA ile seyreltin.
4.Kalite Kontrol ve CHOK1 HCP Standartlarının Hazırlanması
| Tüp HAYIR. | Orijinal | Konsantrasyon | Hacim | %1BSA | Toplam ses | Final |
| A | Standart | 0,5 mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tablo: Kalite Kontrol ve Standartların Hazırlanması
Test Prosedürü
1.Reaktifleri yukarıdaki "Reaktif Hazırlama" bölümünde belirtildiği gibi hazırlayın.
2.Her kuyucuğa 50μL standart, numune ve QC (Tablo 3'e bakın) alın, ardından 100μL Saptama solüsyonu (2μg/mL) ekleyin;Plakayı kapatıcıyla örtün ve ELISA plakasını termomiksere yerleştirin.500 devir/dakikada, 25±3°C'de 2 saat inkübe edin.
3.Mikroplakayı lavaboya ters çevirin ve kaplama solüsyonunu atın.ELISA plakasını yıkamak ve solüsyonu atmak için her kuyucuğa 300μL %0,05 PBST pipetleyin ve yıkamayı 3 kez tekrarlayın.Plakayı temiz bir kağıt havlu üzerine ters çevirin ve kurulayın.
4.Her kuyucuğa 100μL TMB substratı ekleyin (bkz. Tablo 1), ELISA plakasını kapatın ve 15 dakika boyunca karanlıkta 25±3°C'de inkübe edin.
5.Her kuyucuğa 100μL stop solüsyonunu pipetleyin.
6.Mikroplak okuyucu ile 450/650nm dalga boyunda absorbansı ölçün.
7.Verileri SoftMax veya eşdeğer bir yazılımla analiz edin.Dört parametreli lojistik regresyon modelini kullanarak standart eğriyi çizin.
Standart Eğri Örneği
NOT: Numunedeki HCP konsantrasyonu standart eğrinin üst sınırını aşarsa testten önce seyreltme tamponu ile uygun şekilde seyreltilmesi gerekir.
NOTLAR
Durdurma solüsyonu 2M sülfürik asittir, lütfen sıçramayı önlemek için dikkatli kullanın!
