DNase I
DNase I (Deoksiribonükleaz I), tek veya çift sarmallı DNA'yı sindirebilen bir endodeoksiribonükleazdır.Fosfodiester bağlarını tanır ve bölerek monodeoksinükleotidler veya 5'-terminalinde fosfat grupları ve 3'-terminalinde hidroksil bulunan tek veya çift sarmallı oligodeoksinükleotidler üretir.DNase I'in aktivitesi Ca2+'ya bağlıdır ve Mn2+ ve Zn2+ gibi iki değerli metal iyonları tarafından aktive edilebilir.5 mM Ca2+ enzimi hidrolize karşı korur.Mg2+ varlığında enzim, DNA'nın herhangi bir zincirindeki herhangi bir bölgeyi rastgele tanıyabiliyor ve parçalayabiliyor.Mn2+ varlığında, DNA'nın çift iplikçikleri aynı anda tanınabilir ve düz uçlu DNA fragmanları veya 1-2 nükleotid çıkıntılı yapışkan uçlu DNA fragmanları oluşturmak için hemen hemen aynı bölgede bölünebilir.
Ürün Özelliği
Sığır Pankreas DNase I, maya ekspresyon sisteminde eksprese edildi ve saflaştırıldı.
Cbileşenler
| Bileşen | Hacim | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNaz I, RNaz içermez | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| 10×DNaz I Tamponu | 1mL | 1mL | 5× 1mL | 5× 10mL |
Nakliye ve depolama
1. Depolama Kararlılığı: – Depolama için 15°C~-25°C;
2.Taşıma Kararlılığı: Buz kütleleri altında taşıma;
3. Sağlananlar: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, %50 gliserol, 25°C'de pH 7,6.
Birim Tanımı
Bir birim, 37°C'de 10 dakikada 1 µg pBR322 DNA'yı tamamen parçalayacak enzim miktarı olarak tanımlanır.
Kalite kontrol
RNaz:37°C'de 4 saat süreyle 1,6 μg MS2 RNA içeren 5U DNaz I, agaroz jel elektroforezi ile belirlendiği üzere herhangi bir bozulma sağlamaz.
Bakteriyel Endotoksin:LAL testi, Çin Farmakopesi IV 2020 baskısına göre, jel limit test yöntemi, genel kural (1143).Bakteriyel endotoksin içeriği ≤10 EU/mg olmalıdır.
Kullanım için talimatlar
1. RNase içermeyen tüpte reaksiyon solüsyonunu aşağıda listelenen oranlara göre hazırlayın:
| Bileşen | Hacim |
| RNA | X µg |
| 10 × DNaz I Tamponu | 1 μL |
| DNaz I, RNaz içermez(5U/μL) | µg RNA başına 1 U |
| ggh2O | 10 μL'ye kadar |
15 dakika boyunca 2,37 °C;
3. Reaksiyonu durdurmak için sonlandırma tamponunu ekleyin ve DNase I'i etkisiz hale getirmek için 10 dakika boyunca 65°C'de ısıtın. Örnek, bir sonraki transkripsiyon deneyi için doğrudan kullanılabilir.
Notlar
1. μg RNA başına 1U DNaz I veya 1 μg'dan az RNA için 1U DNase I kullanın.
2.EDTA, enzim inaktivasyonu sırasında RNA'nın bozulmasını önlemek için 5 mM'lik nihai konsantrasyona eklenmelidir.
