RT-LAMP Kolorimetrik Ana Karışım HCB5204A
Bu ürün reaksiyon tamponu, RT-Enzimler Karışımı (Bst DNA polimeraz ve ısıya dayanıklı ters transkriptaz), liyofilize Koruyucular ve kromojenik boya bileşenleri içerir.Kullanmak için sadece Tampon kullanın, reaksiyon enzimi ve primer karıştırılır ve şablona eklenir;Liyofilize koruyucunun eklenmesi düz olabilir.Bir liyofilizatöre bağlanarak liyofilize edildi ve kullanıldığında yalnızca primerler ve şablonlar eklendi.Bu kit amplifikasyonun hızlı ve net bir görsel tespitini sağlar; negatif reaksiyon kırmızıyla gösterilir ve pozitif reaksiyon sarıya dönüşle gösterilir.
Bileşen
| Bileşen | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Döngü aracılı Amplifikasyon Tamponu (boya ile) | 0,96 ml | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| RT-Enzimler Karışımı | 270 mcL | 2,70 ml | 2,70 mL×10 |
| Liyofilize koruyucu | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Uygulamalar
DNA veya RNA izotermal amplifikasyonu için.
Depolama koşulları
Kuru buzla taşınır, -25~ -15°C'de saklanır.Sık donma-çözülmeden kaçının, ürün 12 ay geçerlidir.
Protokol
1.Kullanılacak reaksiyon tamponunu oda sıcaklığında çözün.Tüpleri kısaca vorteksleyin veya iyice karıştırmak için birkaç kez ters çevirin, ardından sıvıyı tüpün dibine toplamak için santrifüjleyin.
2.Reaksiyon sisteminin hazırlanması.Bu reaktif iki reaksiyon sisteminde hazırlanabilir; sıvı reaksiyon karışımı ve liyofilize sistem karışımı.
1) Sıvı reaksiyon karışımını hazırlayın
| Bileşen | Hacim |
| Döngü aracılı Amplifikasyon Tamponu (boya ile) | 10 μL |
| RT-Enzimler Karışımı | 2,8 μL |
| 10 × Astar Karışımıa | 5 μL |
| Şablonlar DNA/RNA b | × μL |
| Nükleaz içermeyen Su | 50 μL'ye kadar |
2) Liyofilizasyon sistemi karışımı
① Liyofilize karışımı hazırlayın
| Bileşen | Hacim |
| Döngü aracılı Amplifikasyon Tamponu (boya ile) | 10 μL |
| Liyofilize koruyucu | 20 mcL |
| RT-Enzimler Karışımı | 2,8 μL |
| Nükleaz içermeyen Su | 50 μL'ye kadar |
② Liyofilizasyon: Hazırlanan Karışım 50μL'lik bir sistemde liyofilize edildi
③ Reaksiyon karışımını hazırlayın
| Bileşen | Hacim |
| Liyofilize karışım | 1 parça |
| 10 × Astar Karışımıa | 5 μL |
| Şablonlar DNA/RNA b | × μL |
| Nükleaz içermeyen Su | 50 μL'ye kadar |
Notlar:
1 A.10×Primer Karışımı: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Döngü F/B;
2)b.Nükleik asit şablonu için DEPC (suda çözünür) önerilir.
1.65°C'de 30-45 dakika inkübe edin; bu süre, renk değişimi Reaksiyon süresine göre uygun şekilde uzatılabilir.
2.Çıplak gözle bakıldığında sarı pozitif, kırmızı ise negatifti.
Notlar
1.Tampon tüpünün dibinde tuz görünebilir, kısa bir süre vorteksleyin veya oda sıcaklığında iyice karıştırmak için tüpleri birkaç kez ters çevirin.
2.Reaksiyon sıcaklığı, primerlerin durumuna göre 62°C ile 68°C arasında optimize edilebilir.
3.Paketlenen reaktifler uzun süre havaya maruz bırakılmamalıdır.
4.Kırmızı ve sarı renk değişikliği reaksiyonu, reaksiyon sisteminin pH değişimine bağlıdır; lütfen Tris nükleik asit içeren depolama solüsyonunu kullanmayın, ddH kullanılması önerilir.2O depolanmış nükleik asit;
5.Deney, reaksiyon sisteminin hazırlanması, liyofilizasyon ve numune işleme ve numune ekleme sürecini içerecek şekilde standartlaştırılmalıdır;
6.Kontaminasyonu önlemek için reaksiyon sisteminin ultra temiz bir tezgahta hazırlanması önerilir. Yanlış pozitif girişimi önlemek için odanın çeker ocaklarına şablonlar ekleyin.
