Sıcaklığa Duyarlı UNG
Sıcaklığa Duyarlı UNG (TS-UNG), E. coli'de rekombinant ekspresyonla elde edilen bir üründür.Enzim, urasil içeren tek ve çift sarmallı DNA'dan serbest urasil salınımını katalize eder ve RNA'ya karşı etkisizdir.E. coli gen kökenli geleneksel UNG enzimi ile karşılaştırıldığında, TS-UNG enzimi düşük sıcaklıklarda (20°C~37°C) daha yüksek aktiviteye sahiptir ve sıcaklığa duyarlıdır ve kolayca inaktive edilir (50°C), dUTP içeren amplifikasyonun bozulmasını önler geleneksel UNG enziminin inaktivasyonundan sonra kalabilecek kalıntı aktivite ile ürünleri oda sıcaklığında.Bu nedenle TS-UNG enzimi sadece PCR kontaminasyonunu önleme reaksiyonu için uygun değildir, aynı zamanda RT-PCR amplifikasyon programıyla da iyi uyum sağlar ve RT-PCR kontaminasyon önleme reaksiyonunda kullanılabilir.
Önerilen Uygulama
Kontaminasyon Önleme Amplifikasyonu
Saklama Durumu
-20°C'de uzun süreli saklama için, kullanımdan önce iyice karıştırılmalıdır, sık donma-çözülmeden kaçınılmalıdır.
Depolama arabelleği
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizatör, %50 Gliserol.
Birim Tanımı
dU bazları içeren 1 µg tek sarmallı DNA'yı 37°C'de 1 saatte parçalamak için gereken enzim miktarı 1 birim aktivitedir (U).
Kalite kontrol
1.SDS-PAGE elektroforetik saflığı %98'den fazla
2.Bozunma aktivitesi, partiden partiye kontrol, stabilite
3.Eksojen nükleaz aktivitesi yok, eksojen endonükleaz veya ekzonükleaz kontaminasyonu yok.
Talimatlar
| Bileşenler | Hacim (μL) | Nihai konsantrasyon |
| 10 × PCR Tamponu (dNTP içermez, Mg²+özgür) | 5 | 1× |
| dUTP'ler (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 uM |
| dUTP (dTTP'yi değiştirin) | - | 200-600 uM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1.25U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5U (0,1-0,5U) |
| 25 × Astar KarışımıA | 2 | 1× |
| Şablon | - | <1μg/reaksiyon |
| ddH₂O | 50'ye kadar | - |
Not: a: qPCR/qRT-PCR için kullanılıyorsa floresan prob reaksiyon sistemine eklenmelidir.Genellikle 0,2 μM'lik son primer konsantrasyonu iyi sonuçlar verebilir;Reaksiyon performansı zayıf olduğunda primer konsantrasyonu 0,2-1 μM aralığında ayarlanabilir.Genellikle prob konsantrasyonu 0,1-0,3 μM aralığında optimize edilir.Primer ve probun en iyi kombinasyonunu bulmak için konsantrasyon gradyanı deneyleri yapılabilir.
Notlar
1.TS-UNG enziminin optimal reaksiyon sıcaklığı nispeten düşüktür ve 20°C~37°C aralığında optimize edilebilir, enzim dozajı ve reaksiyon süresi 0,1~0,5 U, 5~ aralığında optimize edilebilir 10 dk;ve enzim, ters transkripsiyon sürecinde etkisiz hale getirilebilir.
2.Kontaminasyonu önlemek için PCR ve RT-PCR'ye uygundur.
3.Sık sık donma-çözülmeden kaçının ve büyük sıcaklık dalgalanmalarına maruz bırakmayın.
4.Amplifiye edilecek farklı genler, dUTP'den farklı yararlanma verimliliğine ve UNG enzimine karşı duyarlılığa sahiptir; bu nedenle, UNG sisteminin kullanımı tespit duyarlılığında bir azalmaya yol açarsa reaksiyon sistemi ayarlanmalı ve optimize edilmelidir, teknik desteğe ihtiyacınız varsa lütfen iletişime geçin Şirketimiz.
