Ultra Nükleaz
UltraNuclease, Serratia marcescens'ten türetilen, çift veya tek sarmallı, doğrusal veya dairesel DNA veya RNA'yı geniş bir koşullar altında parçalayabilen, nükleik asitleri 3-5 baz uzunluğunda 5'-monofosfat oligonükleotitlere tamamen parçalayabilen, genetik olarak tasarlanmış bir dendonuklazdır. .Genetik mühendisliği modifikasyonundan sonra ürün, bilimsel araştırmalarda hücre süpernatanının ve hücre lizatının viskozitesini azaltan, aynı zamanda proteinin saflaştırma verimliliğini ve fonksiyonel araştırmasını geliştiren Escherichia coli'de (E. coli) fermente edildi, eksprese edildi ve saflaştırıldı.Ayrıca gen terapisinde, virüs saflaştırmasında, aşı üretiminde, protein ve polisakarit ilaç endüstrisinde konakçı kalıntı nükleik asit giderme reaktifi olarak da kullanılabilir.
Ürün Özellikleri
| CAS Numarası. | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Moleküler ağırlık | 30kDa |
| İzoelektrik Nokta | 6.85 |
| Protein Saflığı | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Spesifik Faaliyet | ≥1.1×106U/mg |
| Optimum Sıcaklık | 37°C |
| Optimum pH | 8.0 |
| Proteaz Etkinliği | olumsuz |
| Biyolojik yük | <10CFU/100.000U |
| Artık Konakçı Hücre Proteini | ≤10ppm |
| Ağır metal | ≤10ppm |
| Bakteriyel Endotoksin | <0,25EU/1000U |
| Depolama Arabelleği | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2 ， 20mM NaCl ，%50 Gliserol |
Depolama koşulları
≤0°C nakliye; -25~-15°C Depolama, 2 yıl geçerlilik (donma-çözülmeden kaçının).
Birim Tanımı
△A260'ın emilim değerini 37 °C'de, pH 8,0'da 30 dakika içinde 1,0 oranında değiştirmek için kullanılan enzim miktarı, oligonükleotidlere kesilerek sindirilmiş 37μg somon sperm DNA'sına eşdeğerdir, aktif birim (U) olarak tanımlandı.
Kalite kontrol
Artık Konakçı Hücre Proteini: ELISA kiti
•Proteaz Kalıntılar: 250KU/mL UltraNuclease substratla 60 dakika boyunca reaksiyona girdi, herhangi bir aktivite tespit edilmedi.
•Bakteriyel Endotoksin: LAL-Test, Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi Cilt 4 (2020 Baskısı) jel limiti test yöntemi.Genel Kurallar (1143).
•Biyolojik yük: Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi Cilt 4 (2020 Baskısı) - Genel
Sterilite Testi Kuralları (1101), PRC Ulusal Standardı, GB 4789.2-2016.
•Ağır metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operasyon
SDS konsantrasyonu %0,1'in veya EDTA'nın üzerinde olduğunda UltraNuclease aktivitesi önemli ölçüde inhibe edildi
konsantrasyonu 1 mM'nin üzerindeydi. Yüzey Aktif Madde Triton X- 100, Tween 20 ve Tween 80'in nükleaz üzerinde etkisi yoktu
Konsantrasyon %1,5'in altında olduğunda özellikler.
| Operasyon | Optimum Çalışma | Geçerli İşlem |
| Sıcaklık | 37°C | 0-45°C |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100mM |
| 2-Merkaptoetanol | 0-100 mM | >100mM |
| Tek değerlikli metal iyonu (Na+, K+ vb.) | 0-20 mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Kullanım ve Dozaj
• Aşı ürünlerinden ekzojen nükleik asidi çıkarın, kalıntı nükleik asit toksisitesi riskini azaltın ve ürün güvenliğini artırın.
• Besleme sıvısının nükleik asitten kaynaklanan viskozitesini azaltır, işlem süresini kısaltır ve protein verimini artırır.
• İletken parçacığı (virüs, inklüzyon gövdesi vb.) saran nükleik asidi çıkarın.
parçacığın salınmasına ve saflaştırılmasına.
| Deneysel Tip | Protein Üretimi | Virüs, Aşı | Hücre İlaçları |
| Hücre Sayısı | 1g hücre ıslak ağırlığı (10 ml tamponla yeniden süspanse edildi) | 1L fermantasyon sıvı süpernatan | 1L kültür |
| Minimum Dozaj | 250U | 100U | 100U |
| Önerilen doz | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nükleaz tedavisi, kolon kromatografisi, elektroforez ve blot analizi için numunenin çözünürlüğünü ve geri kazanımını iyileştirebilir.
• Gen terapisinde, saflaştırılmış adeno-ilişkili virüsler elde etmek için nükleik asit çıkarılır.
