Warm Start Bst 2.0 DNA Polimeraz (Gliserol içermez)
Bst DNA polimeraz V2, 5'→3' DNA polimeraz aktivitesine ve güçlü zincir değiştirme aktivitesine sahip olan ancak 5'→3' eksonükleaz aktivitesi olmayan Bacillus stearothermophilus DNA Polimeraz I'den türetilir.Bst DNA Polimeraz V2, iplik yer değiştirmesi, izotermal amplifikasyon LAMP (Döngü aracılı izotermal amplifikasyon) ve hızlı sıralama için idealdir.Bst DNA polimeraz V2, oda sıcaklığında DNA polimeraz aktivitesini inhibe edebilen, tersine çevrilebilir modifikasyon teknolojisi ile elde edilen Bst DNA polimeraz V2'ye (HC5005A) dayanan sıcak başlangıçlı bir versiyondur, böylece reaksiyon sistemi, oda sıcaklığında çalıştırılabilir ve formüle edilebilir. -spesifik amplifikasyon ve reaksiyon verimliliğini artırır ve bu versiyon liyofilize edilebilir.Ayrıca aktivitesi yüksek sıcaklıklarda salındığından ayrı bir aktivasyon adımına gerek yoktur.
Bileşenler
| Bileşen | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimeraz V2 (Gliserol içermez)(8U/μL) | 0,2 mL | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Tampon | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 2×10 ml |
Uygulamalar
1.LAMP izotermal amplifikasyonu
2.DNA sarmalı tek yer değiştirme reaksiyonu
3.Yüksek GC gen dizilimi
4.Nanogram seviyesinin DNA dizilimi.
Saklama Durumu
0°C'nin altında nakliye ve -25°C~-15°C'de saklanmalıdır.
Birim Tanımı
Bir birim, 65°C'de 30 dakika içinde asitte çözünmeyen malzemeye 25 nmol dNTP katan enzim miktarı olarak tanımlanır.
Kalite kontrol
1.Protein Saflık Testi (SDS-PAGE):Bst DNA polimeraz V2'nin saflığı, Coomassie Blue tespiti kullanılarak SDS-PAGE analizi ile belirlenen ≥%99'dur.
2.EdonnükleazAktivite:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1 μg λDNA ile 37°C'de 16 saat boyunca inkübasyonu, belirlendiği gibi tespit edilebilir bir bozulmayla sonuçlanmaz.
3.Eksonükleaz Aktivitesi:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1 μg λ -HindⅢ sindirim DNA'sı ile 37°C'de 16 saat boyunca inkübasyonu, belirlendiği gibi tespit edilebilir bir bozulmayla sonuçlanmaz.
4.Nickaz Aktivitesi:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1 μg pBR322 DNA ile 16 saat boyunca 37°C'de inkübasyonu, belirlendiği gibi herhangi bir saptanabilir bozunmayla sonuçlanmaz.
5.RNaz Aktivitesi:Minimum 8 U Bst DNA polimeraz V2 içeren 50 μL reaksiyonun 1,6 μg MS2 RNA ile 37°C'de 16 saat süreyle inkübasyonu, belirlendiği gibi tespit edilebilir bir bozulmayla sonuçlanmaz.
6.E. coliDNA:120 U Bst DNA polimeraz V2, E. coli 16S rRNA lokusuna spesifik primerlerle TaqMan qPCR kullanılarak E. coli genomik DNA'sının varlığı açısından taranır.E. coli genomik DNA kontaminasyonu ≤1 Kopyadır.
LAMBA Reaksiyonu
| Bileşenler | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Tampon | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP'ler (her biri 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Yeşil (25×)a | 1,0 μL |
| Astar karışımıb | 6 μL |
| Bst DNA Polimeraz V2 (Gliserolsüz) (8 U/uL) | 1 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL'ye kadar |
Notlar:
1 A.SYTOTM 16 Yeşil (25×): Deneysel ihtiyaçlara göre diğer boyalar ikame olarak kullanılabilir;
2)b.Primer karışımı: 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB ve diğer hacimlerin karıştırılmasıyla elde edilir.
Reaksiyon ve Durum
1 × HC Bst V2 Tamponu, inkübasyon sıcaklığı 60°C ila 65°C arasındadır.
Isı İnaktivasyonu
80°C, 20 dakika
