2×HiF Taq artı Ana Karışım
Kat Numarası: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Boyalı), Plus HIF DNA Polimeraz, dNTP'ler ve optimize edilmiş tampon içeren, kullanıma hazır 2x önceden karıştırılmış bir çözeltidir.Kolay ve oldukça spesifik Hot Start PCR için oda sıcaklığında polimeraz aktivitesini ve 3'→5' eksonükleaz aktivitesini inhibe eden iki monoklonal antikor ana karışıma eklenir.Enzime uzun bir fragman amplifikasyon kapasitesi kazandırmak için ana karışıma uzatma faktörü eklenir, amplifikasyonun uzunluğu 13 kb'ye kadar olabilir, enzim 5'→3' DNA polimeraz aktivitesine ve 3'→5' DNA polimeraz aktivitesine sahiptir. eksonükleaz aktivitesi, aslına uygunluğu sıradan DNA polimerazın 9 katı olan Taq DNA polimerazın 83 katıdır.Karmaşık şablonların amplifikasyonu için uygundur, amplifikasyon ürünü kör bir uçtur.
2×HIF Taq plus Master Mix (Boyalı) hızlı ve kolay, yüksek hassasiyet, güçlü özgüllük, iyi stabilite vb. avantajlara sahiptir; reaksiyon sisteminin yalnızca primerler ve şablonlar eklemesi gerekir ve iki ile güçlendirilebilir. adım protokolü, deneysel adımları basitleştirir ve zamandan tasarruf sağlar.Bu ürün elektroforez gösterge boyaları içerir ve PCR ürünleri doğrudan elektroforez için kullanılabilir.Ek olarak ürün ayrıca belirli bir koruyucu madde içerir, böylece ana karışım tekrarlanan donma-çözülme sonrasında stabil aktiviteyi koruyabilir.
Depolama koşulları
Ürünler 1 yıl boyunca -25~-15°C'de saklanmalıdır.
Özellikler
| Ürün özellikleri | Ana Karışım |
| Konsantrasyon | 2× |
| Sıcak Başlangıç | Dahili Sıcak Başlatma |
| Çıkıntı | Köreltmek |
| Reaksiyon hızı | Ani |
| Boyut (Nihai Ürün) | 13kb'ye kadar |
| Taşıma koşulları | Kuru buz |
| Ürün tipi | Yüksek sadakatli PCR ön karışımları |
Talimatlar
1.PCR Reaksiyon Sistemi
| Bileşenler | Hacim (μL) |
| DNA Şablonu | Uygun |
| İleri primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Ters Astar (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq artı Ana Karışım | 25 |
| ggh2O | 50'ye kadar |
2.Farklı şablonların önerilen kullanımı
| Şablon türü | Parçaları 1kb'den 10 kb'ye yükseltin |
| genomik DNA | 50ng-200ng |
| Plazmid veya Viral DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (Nihai PCR reaksiyon hacminin %10'unu aşmayın) |
3.Amplifikasyon Protokolü
1) İki Adımlı Protokol (karmaşıklık şablonu)
| Döngü adımı | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| İlk denatürasyon | 98°C | 3 dakika | 1 |
| Denatürasyon | 98°C | 10 saniye | 30-35 |
| Eklenti | 68°C | 30 saniye/kb | |
| Son uzatma | 72°C | 5 dakika | 1 |
2) Üç Adımlı Protokol (normal protokol)
| Döngü adımı | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| İlk denatürasyon | 98°C | 3 dakika | 1 |
| Denatürasyon | 98°C | 10 saniye | 30-35 |
| Tavlama | 60°C | 20 saniye | |
| Eklenti | 72°C | 30 saniye/kb | |
| Son uzatma | 72°C | 5 dakika | 1 |
3) Tavlama Gradyan Protokolü (karmaşıklık şablonu)
| Döngü adımı | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| İlk denatürasyon | 98°C | 3 dakika | 1 |
| Denatürasyon | 98°C | 10 saniye | 15 (Döngü başına 1°C azalma) |
| Gradyan tavlama | 70-55°C | 20 saniye | |
| Eklenti | 72°C | 30 saniye/kb | |
| Denatürasyon | 98°C | 10 saniye |
20 |
| Tavlama | 55°C | 20 saniye | |
| Eklenti | 72°C | 30 saniye/kb | |
| Son uzatma | 72°C | 5 dakika | 1 |
Farklı amplifikasyon protokolü kapsamındaki özellikler
| Protokoll | İki adım | Üç adım | Gradyan tavlama |
| Özel. | hızlı | orta | yavaş |
| özgüllük | yüksek | orta | yüksek |
| PCR verimi | orta | yüksek | orta |
| Algılama hızı | yüksek | orta | yüksek |
Notlar
Sağlığınızı ve güvenliğinizi sağlamak için lütfen laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi gerekli KKD'yi giyin!
