DNaz I (Rnazsız)(5u/ul)
Kat No: HC4007A
DNase I (Deoksiribonükleaz I), tek veya çift sarmallı DNA'yı sindirebilen bir endodeoksiribonükleazdır.Fosfodiester bağlarını tanır ve bölerek monodeoksinükleotidler veya 5'-terminalinde fosfat grupları ve 3'-terminalinde hidroksil bulunan tek veya çift sarmallı oligodeoksinükleotidler üretir.DNaz I'in aktivitesi Ca'ya bağlıdır2+ve Mn gibi iki değerlikli metal iyonları tarafından etkinleştirilebilir.2+ve Zn2+.5 mM Ca2+enzimi hidrolizden korur.Mg varlığında2+Enzim, herhangi bir DNA zincirindeki herhangi bir bölgeyi rastgele tanıyabiliyor ve parçalayabiliyordu.Mn'nin huzurunda2+DNA'nın çift iplikçikleri eş zamanlı olarak tanınabilir ve hemen hemen aynı bölgeden kesilerek düz uçlu DNA fragmanları veya 1-2 nükleotid çıkıntılı yapışkan uçlu DNA fragmanları oluşturulabilir.
Bileşenler
| İsim | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaz I, RNaz içermez | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| 10×DNaz I Tamponu | 1mL | 1mL | 5 × 1 mL | 5×10 ml |
Depolama koşulları
-25°C~-15°C depolama için;Buz paketleri altında taşıyın.
Talimatlar
1. Reaksiyon solüsyonunu RNaz içermeyen tüpte aşağıda listelenen oranlara göre hazırlayın:
| Bileşen | Hacim |
| RNA | X µg |
| 10 × DNaz I Tamponu | 1μL |
| DNaz I, RNaz içermez(5U/μL) | µg RNA① başına 1 U |
| ggh2O | 10μL'ye kadar |
Not: ①RNA miktarına göre eklenmesi gereken DNaz I hacmini hesaplayın.
2. 37°C'de 15 dakika;
3. 2,5mM~5mM'lik nihai konsantrasyona 0,5M EDTA ekleyin ve reaksiyonu durdurmak için 65°C'de 10 dakika ısıtın.Örnek, ters transkripsiyon gibi bir sonraki reaksiyon için doğrudan kullanılabilir.deney.
Birim Tanımı
Bir birim, 1 µg pBR322'yi tamamen parçalayacak enzim miktarı olarak tanımlanır.37°C'de 10 dakikada DNA.
Kalite kontrol
RNaz:37°C'de 4 saat boyunca 1,6 µg MS2 RNA ile 5U DNaz I, hiçbir bozulma sağlamazagaroz jel elektroforezi ile belirlenir.
Notlar
1. Lütfen 0.5MEDTA'yı kendiniz hazırlayın.
2. µg RNA başına 1U DNase I kullanın.Ancak RNA 1 µg'dan azsa lütfen 1U DNase I kullanın.
3. Lütfen enzimi çalışma sırasında buza koyun.
