RNAz A
Ribonükleaz A (RNaseA), molekül ağırlığı yaklaşık 13,7 kDa olan 4 disülfit bağı içeren tek sarmallı bir polipeptittir.RNaz A, C ve U kalıntılarındaki tek sarmallı RNA'yı spesifik olarak parçalayan bir endoribonükleazdır.Spesifik olarak, bölünme, bir nükleotidin 5'-ribozu ve bitişik pirimidin nükleotidinin 3'-ribozu üzerindeki fosfat grubu tarafından oluşturulan fosfodiester bağını tanır, böylece 2, 3'-Siklik fosfatlar karşılık gelen 3'e hidrolize edilir. 'nükleosid fosfatlar (örneğin pG-pG-pC-pA-pG, pG-pG-pCp ve A-PG'yi oluşturmak için RNase A tarafından bölünür).RNaz A, tek sarmallı RNA'nın bölünmesinde en aktif olanıdır.Önerilen çalışma konsantrasyonu 1-100μG/mL'dir ve çeşitli reaksiyon sistemleriyle uyumludur.Düşük tuz konsantrasyonu (0-100 mM NaCl), tek sarmallı RNA, çift sarmallı RNA ve RNA-DNA hibridizasyonuyla oluşturulan RNA zincirlerini kesmek için kullanılabilir.Bununla birlikte, yüksek tuz konsantrasyonunda (≥0,3 M), RNaz A yalnızca spesifik olarak tek sarmallı RNA'yı böler.
RNaz A, en yaygın olarak plazmid DNA veya genomik DNA'nın hazırlanması sırasında RNA'yı uzaklaştırmak için kullanılır. Hazırlama işlemi sırasında DNaz'ın aktif olup olmadığı reaksiyonu kolaylıkla etkileyebilir.DNaz aktivitesini etkisiz hale getirmek için geleneksel su banyosunda kaynatma yöntemi kullanılabilir.Bu ürün DNaz ve proteaz içermez ve kullanım öncesinde ısıl işlem gerektirmez.Ayrıca bu ürün RNaz koruma analizi ve RNA dizi analizi gibi moleküler biyoloji deneylerinde de kullanılabilir.
Depolama koşulları
Ürün -25~-15°C sıcaklıkta 2 yıl süreyle saklanabilir.
Talimatlar
Bu, RNase A depolama çözümünü hazırlamak için yaygın yöntemlerden biridir.tarafından da hazırlanabilir.Laboratuvardaki veya referans literatürdeki geleneksel yöntemlere göre diğer yöntemler (örn.doğrudan 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 veya Tris-NaCl çözeltisi içinde çözünüyor)
1. 10 mg/mL RNaz A depolama çözeltisi hazırlamak için 10 mM sodyum asetat (pH 5,2) kullanın.
2. 100 ° C'de 15 dakika ısıtma
3. Oda sıcaklığına soğutun, 1/10 hacim 1 M Tris-HCl (pH 7,4) ekleyin, pH'ını 7,4'e ayarlayın (içinörneğin, 500 ml 10g/ml RNaz depolama çözeltisi 1M Tris-HCL, PH7.4 ekleyin)
4. Dondurulmuş depolama için -20°C'de alt paketlenir ve 2 yıla kadar stabil olabilir.
[Notlar]: RNaseA çözeltisini nötr koşullar altında kaynatırken, RNaz çökelmesi oluşacaktır;Daha düşük bir pH'da kaynatın ve eğer protein safsızlıklarının varlığından kaynaklanabilecek çökelme gözlemlenebilir.Kaynattıktan sonra tortu bulunursa, yabancı maddeler yüksek hızlı santrifüjleme (13000 rpm) ile çıkarılabilir ve daha sonra dondurarak depolama için alt paketlenebilir.
Ürün Bilgisi
| Eş anlamlı | Ribonükleaz I;Pankreas ribonükleazı;Ribonükleaz 3'-pirimidnooligonükleotidohidrolaz;Rnaz A;Endoribonülseaz I |
| CAS Numarası. | 9001-99-4 |
| Dış görünüş | Beyaz liyofilize toz |
| Moleküler ağırlık | ~ 13.7kDa (amino asit dizisi) |
| PH değeri | 7,6 (aktivite aralığı 6-10) |
| Uygun Sıcaklık | 60°C (Faaliyet aralığı 15-70°C) |
| Aktivasyon maddesi | Na2+.k+ |
| inhibitör | Rnaz İnhibitörü |
| Etkisizleştirme yöntemi | Isıtılarak etkisiz hale getirilemez, santrifüj kolonunun kullanılması tavsiye edilir |
| Menşei | Sığır |
| çözünürlük | Suda çözünür (10mg/ml) |
| Kuru kayıp | ≤%5,0 |
| Enzim aktivitesi | ≥60 Kunitz birimi/mg |
| İzoelektrik nokta | 9.6 |
Notlar
Güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldivenler giyin.
