Robustart Taq DNA Polimeraz
Robustart Taq DNA Polimeraz, sıcak başlangıçlı bir DNA polimerazıdır.Bu ürün, PCR sisteminin hazırlanması ve amplifikasyonu sürecinde primerlerin spesifik olmayan tavlanmasının veya primer agregasyonunun neden olduğu spesifik olmayan reaksiyonu daha iyi inhibe etmekle kalmaz.Bu nedenle mükemmel bir özgüllüğe sahiptir ve düşük konsantrasyonlu şablonların amplifikasyonu için daha etkilidir ve multipleks PCR amplifikasyon reaksiyonu için uygundur.Üstelik bu ürünün uygulanabilirliği çok iyi olup, farklı tipteki PCR reaksiyonlarında stabil amplifikasyon sonuçları elde edilebilmektedir.
Bileşenler
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimeraz
2.10 × PCR Tampon II (Mg²+ içermez) (isteğe bağlı)
3.25 mM MgCl2(isteğe bağlı)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ içermez) dNTP ve Mg²+ içermez, lütfen dNTP'leri ve MgCl'yi ekleyin2Reaksiyon sistemini hazırlarken.
Önerilen Uygulamalar
1.Hızlı amplifikasyon.
2.Çoklu amplifikasyon.
3.Kan, swab ve diğer örneklerin doğrudan amplifikasyonu.
4.Solunum hastalıkları tespiti.
Saklama Durumu
-20°C'de uzun süreli saklama için, kullanımdan önce iyice karıştırılmalıdır, sık donma-çözülmeden kaçınılmalıdır.
*Soğutulduktan sonra çökelme meydana gelirse bu normaldir;Karıştırılıp kullanılmadan önce oda sıcaklığına getirilmesi tavsiye edilir.
Birim Tanımı
Bir aktif birim (U), şablon/primer olarak aktifleştirilmiş somon sperm DNA'sı kullanılarak 74°C'de 30 dakika boyunca asitte çözünmeyen malzemeye 10 nmol deoksiribonükleotidi dahil eden enzim miktarı olarak tanımlanır.
Kalite kontrol
1.SDS-PAGE elektroforetik saflığı %98'den fazladır.
2.Amplifikasyon hassasiyeti, partiden partiye kontrol, kararlılık.
3.Eksojen nükleaz aktivitesi yok, eksojen endonükleaz veya ekzonükleaz kontaminasyonu yok
Talimatlar
Reaksiyon Kurulumu
| Bileşenler | Hacim (μL) | Nihai Konsantrasyon |
| 10 × PCR Tampon II (Mg²+ içermez)a | 5 | 1× |
| dNTP'ler (her biri dNTP 10 mM) | 1 | 200 uM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA Polimeraz (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Astar karışımıB | 2 | 1× |
| Şablon | - | < 1 μg/reaksiyon |
| ggh2O | 50'ye kadar | - |
Notlar:
1 A.Tampon, dNTP ve Mg²+ içermiyor, lütfen dNTP'leri ve MgCl'yi ekleyin2Reaksiyon sistemini hazırlarken.
2)b.qPCR/qRT-PCR için kullanılıyorsa reaksiyon sistemine floresan problar eklenmelidir.Genellikle 0,2 μM'lik son primer konsantrasyonu iyi sonuçlar verecektir;reaksiyon performansı zayıfsa primer konsantrasyonu 0,2-1 μM aralığında ayarlanabilir.Prob konsantrasyonu genellikle 0,1-0,3 μM aralığında optimize edilir.Primer ve probun en iyi kombinasyonunu bulmak için konsantrasyon gradyanı deneyleri yapılabilir.
Termal bisiklet protokolü
| Düzenli PCRişlem | |||
| Adım | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| Ön denatürasyon | 95°C | 1-5 dakika | 1 |
| Denatürasyon | 95°C | 10-20 saniye | 40-50 |
| Tavlama / Uzatma | 56-64°C | 20-60 saniye | |
| Hızlı PCRişlem | |||
| Adım | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| Ön denatürasyon | 95°C | 30 saniye | 1 |
| Denatürasyon | 95°C | 1-5 saniye | 40-45 |
| Tavlama / Uzatma | 56-64°C | 5-20 saniye | |
Notlar
1.Hızlı DNA polimerazın amplifikasyon hızı 1 kb/10 s'den az olmamalıdır.Farklı PCR cihazlarının sıcaklık artış ve düşme hızı, sıcaklık kontrol modu ve ısı iletim verimliliği büyük ölçüde farklılık gösterir; bu nedenle, belirli hızlı PCR cihazı için en uygun reaksiyon koşullarının optimize edilmesi önerilir.
2.Sistem, daha yüksek özgüllük ve hassasiyetle son derece uyarlanabilir.
3.Yüksek hassasiyetli PCR tespit reaktifleri olarak kullanıma uygundur ve multipleks PCR amplifikasyon reaksiyonlarında kullanılabilir.
4.5'→3' polimeraz aktivitesi, 5'→3' eksonükleaz aktivitesi;3'→5' eksonükleaz aktivitesi yok;düzeltme işlevi yok.
5.PCR ve RT-PCR'nin kalitatif ve kantitatif testleri için uygundur.
6.PCR ürününün 3' ucu, doğrudan bir T vektörüne klonlanabilen A'dır.
7.Üç aşamalı yöntem, düşük tavlama sıcaklığına sahip primerler için veya 200 bp'den uzun parçaların amplifikasyonu için önerilir.
