Viral DNA/RNA Ekstraksiyon Kiti
Bu kit, nazofaringeal swablar, çevresel swablar, hücre kültürü süpernatanları ve doku homojenat süpernatanları gibi örneklerden yüksek saflıkta viral DNA/RNA'nın hızlı ekstraksiyonu için uygundur.Kit, yüksek kalitede viral DNA/RNA'nın ekstraksiyonu için fenol/kloroform organik solventlerin veya zaman alıcı alkol çökeltmelerinin kullanılması ihtiyacını ortadan kaldıran silika membran saflaştırma teknolojisine dayanmaktadır.Elde edilen nükleik asitler safsızlık içermez ve ters transkripsiyon, PCR, RT-PCR, gerçek zamanlı PCR, yeni nesil dizileme (NGS) ve Northern blot gibi aşağı yönlü deneylerde kullanıma hazırdır.
Depolama koşulları
15 ~ 25°C'de saklayın ve oda sıcaklığında taşıyın
Bileşenler
| Bileşenler | 100RXNS |
| Tampon VL | 50 mi |
| Tampon RW | 120ml |
| RNaz içermeyen ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA Sütunları | 100 |
| Toplama Tüpleri (2ml) | 100 |
| RNase içermeyen Toplama Tüpleri(1 .5ml) | 100 |
Tampon VL:Lizis ve bağlanma için bir ortam sağlayın.
Tampon RW:Artık proteinleri ve diğer yabancı maddeleri çıkarın.
RNaz içermeyen ddH2O:Döndürme kolonundaki membrandan DNA/RNA'yı elute edin.
FastPure RNA Sütunları:Özellikle DNA/RNA'yı adsorbe eder.
Toplama Tüpleri 2 ml:Süzüntüyü toplayın.
RNase içermeyen Toplama Tüpleri 1,5 ml:DNA/RNA'yı toplayın.
Uygulamalar
Nazofaringeal swablar, çevresel swablar, hücre kültürü süpernatanları ve doku homojenat süpernatanları.
Kendi kendine hazırlanan Maternumaralar
RNaz içermeyen pipet uçları, 1,5 ml RNaz içermeyen santrifüj tüpleri, santrifüj, vorteks karıştırıcı ve pipetler.
Deney Süreci
Bir biyogüvenlik kabininde aşağıdaki adımların tümünü gerçekleştirin.
1. RNaz içermeyen bir santrifüj tüpüne 200 ul numune ekleyin (yetersiz numune durumunda PBS veya %0,9 NaCl ile tamamlayın), 500 ul Tampon VL ekleyin, 15 – 30 saniye vorteksleyerek iyice karıştırın ve santrifüjleyin. Karışımı tüpün dibinde toplamak için kısaca.
2. FastPure RNA Kolonlarını 2 ml'lik Toplama Tüplerine yerleştirin.Karışımı Adım 1'den FastPure RNA Kolonlarına aktarın, 12.000 rpm'de (13.400 x g) 1 dakika santrifüjleyin ve süzüntüyü atın.
3. FastPure RNA Kolonlarına 600 ul Tampon RW ekleyin, 12.000 rpm'de (13.400 x g) 30 saniye boyunca santrifüjleyin ve süzüntüyü atın.
4. 3. Adımı tekrarlayın.
5. Boş kolonu 12.000 rpm'de (13.400 x g) 2 dakika boyunca santrifüjleyin.
6. FastPure RNA Sütunlarını dikkatli bir şekilde yeni 1,5 ml'lik RNaz içermeyen Toplama Tüplerine (kit içerisinde sağlanır) aktarın ve kolona dokunmadan membranın merkezine 30 – 50 µl RNaz içermeyen ddH2O ekleyin.1 dakika boyunca oda sıcaklığında beklemeye bırakın ve 1 dakika boyunca 12.000 rpm'de (13.400 x g) santrifüjleyin.
7. FastPure RNA Sütunlarını atın.DNA/RNA sonraki analizler için doğrudan kullanılabilir veya kısa bir süre için -30~-15°C'de veya daha uzun bir süre için -85~-65°C'de saklanabilir.
Notlar
Yalnızca araştırma amaçlıdır.Teşhis prosedürlerinde kullanılmaz.
1. Numuneleri önceden oda sıcaklığına dengeleyin.
2. Virüsler oldukça bulaşıcıdır.Lütfen deney öncesinde gerekli tüm güvenlik önlemlerinin alındığından emin olun.
3. Numunenin tekrar tekrar dondurulup çözülmesinden kaçının çünkü bu, ekstrakte edilen viral DNA/RNA'nın bozulmasına veya veriminin azalmasına neden olabilir.
4. Kendi kendine hazırlanan ekipman, RNaz içermeyen pipet uçları, 1,5 ml RNaz içermeyen santrifüj tüpleri, santrifüj, vorteks karıştırıcı ve pipetleri içerir.
5. Kiti kullanırken laboratuvar önlüğü, tek kullanımlık lateks eldivenler ve tek kullanımlık maske giyin ve RNaz kontaminasyonu riskini en aza indirmek için RNaz içermeyen sarf malzemeleri kullanın.
6. Aksi belirtilmedikçe tüm adımları oda sıcaklığında gerçekleştirin.
Mekanizma ve İş Akışı
