Multiplex qPCR Probu Ön Karışımı
Kat Numarası: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Boya Bazlı), yüksek hassasiyet ve özgüllük ile karakterize edilen, mavi renkli ve numune ekleme etkisine sahip, 2x gerçek zamanlı kantitatif PCR amplifikasyonu için bir ön çözümdür.Bu ürün, tek bir reaksiyon kuyucuğunda dört adede kadar floresan kantitatif PCR reaksiyonuna olanak tanıyan 2x Mix önceden karıştırılmış bir reaktiftir.Bu ürün, amplifikasyon duyarlılığını ve özgüllüğünü büyük ölçüde artıran Taq enzimini sıcak başlatmak için genetiği değiştirilmiş antikor yöntemini içerir.Aynı zamanda bu ürün, reaksiyonun amplifikasyon verimliliğini artırabilen ve düşük konsantrasyonlu şablonların etkili amplifikasyonunu destekleyebilen çoklu reaksiyon tamponunu derinlemesine optimize etmiştir.Bu ürün genotipleme ve çoklu kantitatif analiz için kullanılabilir.
Şartname
| Sıcak Başlangıç | Dahili sıcak başlangıç |
| Algılama yöntemi | Astar probu tespiti |
| PCR yöntemi | qPCR |
| Polimeraz | Taq DNA polimeraz |
| Örnek türü | DNA |
Depolama koşulları
Ürün kuru buzla gönderilir ve -25~-15°C sıcaklıkta 2 yıl saklanabilir.
Talimatlar
1. TepkiSistem
| Bileşenler | Hacim (μL) | Nihai Konsantrasyon |
| 2× TaqMan multipleks qPCR Ana Karışımı | 12.5 | 1× |
| Astar karışımı (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 µmol/L |
| Prob karışımı (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referans boyası | 0,5 | 1× |
| Şablon DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ggh2O | 25'e kadar | - |
Notlar:Şiddetli çalkalamadan kaynaklanan aşırı kabarcıkları önlemek için kullanmadan önce iyice karıştırın.
A.Primer konsantrasyonu: Primer Karışımı, genellikle her bir primerin nihai konsantrasyonu 0,2 µmol/L olan birden fazla primer çifti içerir ve uygun şekilde 0,1 ile 0,5 µmol/L arasında da ayarlanabilir.
B.Prob konsantrasyonu: Prob Karışımı, farklı floresans sinyallerine sahip birden fazla prob içerir ve her bir probun konsantrasyonu, özel duruma göre 50 ila 250 nmol/L arasında ayarlanabilir.
1.Rox boya referansı: Kuyucuklar arasında oluşturulan floresans sinyali hatasını düzeltmek için Applied Biosystems gibi Gerçek Zamanlı PCR amplifikasyon cihazında kullanılır;Bu ürün Rox boya referansı içermemektedir.Gerekirse Cas#10200 önerilir.
2.Şablon seyreltme: qPCR oldukça hassastır ve şablonun kullanım için seyreltilmesi önerilir.Şablon cDNA stok solüsyonu ise şablon hacmi toplam hacmin 1/10'unu geçmemelidir.
3.Reaksiyon sistemi: Hedef gen amplifikasyonunun etkinliğini ve tekrarlanabilirliğini sağlamak için 25μL,30μL veya 50 μL önerilir.
4.Sistem hazırlığı: Lütfen süper temiz tezgahta hazırlayın ve nükleaz kalıntısı olmayan uçları ve reaksiyon tüplerini kullanın;Filtre kartuşlu uçların kullanılması tavsiye edilir.Çapraz kontaminasyon ve aerosol kontaminasyonundan kaçının.
2.Reaksiyon programı
| Döngü adımı | Sıcaklık. | Zaman | Döngüler |
| İlk denatürasyon | 95°C | 5 dakika | 1 |
| Denatürasyon | 95°C | 15 saniye | 45 |
| Tavlama/Uzatma | 60°C | 30 saniye |
Notlar:
1.Tavlama/Uzatma: Sıcaklık ve süre, tasarlanan primer Tm değerine göre uygun şekilde ayarlanabilir.
2.Floresan sinyal edinimi: Farklı qPCR algılama cihazları için gerekli olan floresan sinyal edinim süresi farklıdır; lütfen minimum süre sınırına göre ayarlayın.Birkaç ortak enstrümanın zamanı aşağıdaki gibi ayarlanır:
20 saniye: Uygulamalı Biyosistemler 7700, 7900HT, 7500 Hızlı
31 saniye: Uygulamalı Biyosistemler 7300
32 saniye: Uygulamalı Biyosistemler 7500
Notlar
Sağlığınızı ve güvenliğinizi sağlamak için lütfen laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi gerekli KKD'yi giyin!
