Multipleks Bir Adım RT-qPCR Premix-UNG
Kat Numarası: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Prob Kiti (UDG Plus), şablon olarak RNA'yı temel alan multipleks kantitatif bir PCR kitidir.Deney sürecinde ters transkripsiyon ve kantitatif PCR aynı tüpte gerçekleştirildi, bu da deneysel işlemi basitleştirdi ve kontaminasyon riskini azalttı.Bu kitte, ilk cDNA dizisi, ısıya dayanıklı Ters Transkriptaz ile verimli bir şekilde sentezlendi ve HotStart Etiket DNA Polimeraz ile niceliksel olarak amplifiye edildi.Kit esas olarak optimize edilmiş MP tamponu, enzim karışımı vb. içerir. Tampon çözeltisi zaten Mg içerir2+ve dNTP.Ek olarak, spesifik olmayan PCR amplifikasyonunu etkili bir şekilde engelleyebilen ve birden fazla qPCR reaksiyonunun amplifikasyon verimliliğini artırabilen faktörler eklenir; bu, amplifikasyon verimliliğini garanti edebilir ve birden fazla amplifikasyon reaksiyonunu gerçekleştirebilir.Aerosol kontaminasyonu riskini etkili bir şekilde önlemek için dUTP/UDG sistemi eklendi.
Bileşenler
1. Tampon
2. Enzim Karışımı
Şartname
| Sıcak Başlangıç | Dahili sıcak başlangıç |
| Algılama yöntemi | Astar probu tespiti |
| PCR yöntemi | Tek adımlı RT-qPCR |
| Polimeraz | Taq DNA polimeraz |
| Örnek türü | DNA |
Depolama koşulları
Ürün kuru buzla gönderilir ve -25~-15°C'de 1 yıl saklanabilir.Sık sık kaçınılmalıdırdonma-çözülme.Ayrı olarak kaydetmeniz önerilir.
Talimatlar
1.Reaksiyon Sistem
| Bileşenler | Hacim (μL) | Nihai Konsantrasyon |
| 2 × MP Arabelleği | 12.5 | 1× |
| Enzim Karışımı | 1 | - |
| Astar/Prob karışımı (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Şablon RNA'sı | 1-10 | - |
| RNaz İçermeyen H2O | 25'e kadar | - |
Notlar:
Kullanmadan önce iyice karıştırdığınızdan emin olun, şiddetli titreşimden kaynaklanan aşırı kabarcıklardan kaçının.
A.Primer konsantrasyonu: Multiplex primer içeren primer karışımı, duruma bağlı olarak optimal primer konsantrasyonu 0,1 ile 1,0μM arasında olabilir.
B.Prob konsantrasyonu: Çoklu prob etiketleme farkı floresan grubunu içeren prob karışımı, duruma bağlı olarak optimum prob konsantrasyonu 0,05 ile 0,5μM arasında olabilir.
C.Şablon seyreltme: qPCR oldukça hassastır ve şablonun seyreltilmesi önerilir.Kontrol Ct değeri 20 ile 35 arası uygundur.
D.Sistemin hazırlanması: Lütfen ultra temiz çalışma masasında, pipetleyicide ve reaksiyon tüpünü nükleaz kalıntısı olmadan hazırlayın;Tabanca başlığının filtre elemanıyla birlikte kullanılması tavsiye edilir.Çapraz kontaminasyon ve aerosol kontaminasyonundan kaçının.
2. Optimize Edilmiş BisikletProtokol
| Döngü adım | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| Ters transkripsiyon | 50°CA | 20 dakika | 1 |
| İlk denatürasyon | 95°C | 5 dakika | 1 |
| Amplifikasyon reaksiyonu | 95°C | 15 saniye |
40-45 |
| 60°C b | 30 saniye c |
Notlar:
A.Ters transkripsiyon: Sıcaklık, 42°C veya 50°C'yi seçebilir.
B.Amplifikasyon reaksiyonu: Tasarlanan primerlerin Tm değerine göre sıcaklık ayarlanır.
C.Floresan sinyal edinimi: Lütfen deneysel prosedürü cihaz kılavuzunun gerekliliklerine göre ayarlayın.
Notlar
Sağlığınızı ve güvenliğinizi sağlamak için lütfen laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi gerekli KKD'yi giyin.
