2×Sensi Direct Premix-UNG (Prob qPCR)
Kat Numarası: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR), DNA ekstraksiyonu veya numune hazırlama olmadan doğrudan numunelerden PCR gerçekleştirmek üzere tasarlanmıştır.Bu reaktif, sıcak başlangıçlı DNA polimeraz, urasil DNA glikosilaz (UNG), RNaz İnhibitörü, MgCl'den oluşur.2kantitatif PCR (qPCR) için dNTP'ler (dTTP yerine dUTP ile) ve stabilizatörler.Bu reaktif yüksek inhibitör toleransı oluşturur ve bu nedenle DNA ekstraksiyonu olmadan boğaz sürüntüsü, tükürük, pıhtılaşma önleyici tam kan, plazma ve serum gibi numunelerin tespitine doğrudan uygulanabilir.Reaktif, anti-inhibitör DNA polimeraz ve UNG enziminin karışık enzimlerini içeren qPCR için özel tampon kullanır.Bu nedenle, inhibitör içeren numunelerde hedef genlerin iyi bir amplifikasyonunu elde edebilir ve PCR kalıntısı ve aerosol kirliliğinin neden olduğu yanlış pozitif amplifikasyonu engelleyebilir.Bu reaktif, Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ve benzeri çoğu floresan kantitatif PCR cihazıyla uyumludur.
Bileşenler
1. 50×SensiDirect Enzim/UNG Karışımı
2. 2×SensiDirect Ön Karışım Tamponu (dUTP)
Depolama koşulları
Tüm bileşenler uzun süreli depolama için -20°C'de ve 3 aya kadar 4°C'de tutulmalıdır.Lütfen çözdürdükten sonra iyice karıştırın ve kullanmadan önce santrifüj edin.Sık donma-çözülmeden kaçının.
Bisiklet Protokolü
| Adım | Sıcaklık | Zaman | Döngü |
| Sindirim | 50°C | 2 dakika | 1 |
| Polimeraz aktivasyonu | 95°C | 1-5 dakika | 1 |
| Denatüre | 95°C | 10-20'ler | 40-50 |
| Tavlama/Uzatma | 56-64°C | 20-60'lar |
Pipetleme Talimatları
| Reaktif | Hacim başına reaksiyon | Reaksiyon başına hacim | Nihai Konsantrasyon |
| 2×SensiDirect Ön Karışım Tamponu (dUTP) | 12,5μL | 25μL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzim/UNG Karışımı | 0,5μL | 1μL | 1× |
| 25×Primer-Prob Karışımı1, 2 | 1μL | 2μL | 1× |
| Örnek3, 4 | - | - | - |
| ggh2O | - | - | - |
| Toplam ses | 25 μL | 50 μL | - |
1. Primerin son konsantrasyonu genellikle 0,2μM'dir.Daha iyi sonuçlar için primer konsantrasyonu 0,2-1μM aralığında optimize edilebilir.
2. Genellikle prob konsantrasyonu 0,1-0,3μM aralığında optimize edilebilir.Probun optimal konsantrasyonu, gerçek zamanlı PCR amplifikasyon cihazı, prob tipi ve floresan etiketleme maddesinin tipi ile ilgilidir.Lütfen cihazın kılavuzuna veya her bir floresan probun özel gereksinimlerine bakın.
3. Farklı türdeki numuneler, farklı türde ve inhibitör içeriği ve hedef genin kopya sayısını içerir.Numune hacmi gerçek duruma göre değerlendirilmelidir.Gerekirse nükleaz içermeyen su veya TE Tamponu ekleyerek numunenin seyreltilmesini yapın.
4. Farklı numunelerin önerilen hacmi:
| Örnek | Bir kişi için hacim 50 μL reaksiyon | Maksimum oran |
| Antikoagüle edilmiş tam kan | 2,5 μL | 5% |
| Plazma | 15 μL | %30 |
| Serum | 10 μL | %20 |
| Boğaz çubuğu | 10 μL | %20 |
| Tükürük | 10 μL | %20 |
Kalite kontrol
1. İşlev tespiti: qPCR'nin duyarlılığı, özgüllüğü ve tekrarlanabilirliği.
2. Ekzojen nükleaz aktivitesi yok: Eksojen endonükleaz ve ekzonükleaz kirliliği yok.
Ürün Notları
1. Bu ürün, 1-5 dakika içinde etkinleştirilebilen yeni bir tür sıcak başlangıçlı DNA polimeraz kullanır. Reaksiyon tamponu optimize edildiğinden, prob yöntemi kullanılarak çift veya çoklu floresan kantitatif PCR için daha uygundur.
2. PCR amplifikasyonunun Rn değeri çok düşükse veya amplifikasyon açıkça inhibe edilmişse, numune miktarının azaltılması, reaksiyon hacminin arttırılması veya numunenin önceden seyreltilmesi sonuçları iyileştirebilir.
3. Kan, tükürük, idrar, boğaz sürüntüsü vb. toplanması klinik kriterlerin gerekliliklerine uygun olmalıdır ve nükleik asit bozulmasını önlemek için taze numune kullanılabilir.
4. Farklı amplikonlar, dUTP'ye karşı farklı kullanım verimliliğine ve UNG'ye karşı duyarlılığa sahip olduğundan, UNG sistemi kullanılırken algılama duyarlılığı azalırsa reaktifler optimize edilmelidir.Gerektiğinde teknik destek için lütfen bizimle iletişime geçin.
5. Tek adımlı reaksiyonlar arasında taşınan PCR ürünlerinin amplifikasyonunu önlemek amacıyla amplifikasyon için özel deney alanı ve pipet gereklidir.Eldivenlerle çalışın ve sık sık değiştirin ve PCR amplifikasyonundan sonra reaksiyon tüpünü açmayın.
