UDG/UNG Enzimleri
UDG (urasil DNA glikosilaz), ssDNA ve dsDNA'da urasil bazı ile şeker-fosfat omurgası arasındaki N-glikosidik bağlantının hidrolizini katalize edebilir.Aerosol kirliliğini kolaylıkla kontrol edebilir ve PCR, qPCR, RT-qPCR ve LAMP gibi yaygın moleküler biyoloji sistemleri için uygundur.
Özellikler
| İfade Ana Bilgisayarı | Urasil DNA glikozilaz geni ile rekombinant E. coli |
| Moleküler ağırlık | 24.8kDa |
| Saflık | ≥%95 (SDS-SAYFA) |
| Isı İnaktivasyonu | 95°C, 5~10 dk |
| Birim Tanımı | Bir birim (U), 25°C'de 30 dakika içinde l μg dU içeren dsDNA'nın hidrolizini katalize etmek için gereken enzim miktarı olarak tanımlanır. |
Depolamak
Ürün iki yıl boyunca -25°C~-15°C'de saklanmalıdır.
Talimatlar
1.PCR reaksiyon karışımının aşağıdaki sisteme göre hazırlanması
| Bileşenler | Hacim (μL) | Nihai konsantrasyon |
| 10×PCR Tamponu (Mg²+Artı) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Süzme |
| Şablon DNA'sı | X | - |
| Astar1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 µmol/L |
| Astar 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 µmol/L |
| Taq DNA Polimeraz (5 U/μL) | 0.5 | 0. 05 U/μL |
| Urasil DNA Glikosilaz (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50'ye kadar | - |
Not: Deneysel gereksinimlere göre dUTP'nin nihai konsantrasyonu 0,2-0,6 mmol/L arasında ayarlanabilmekte ve seçici olarak 0,2 mmol/L dTTP eklenebilmektedir.
2.Amplifikasyon prosedürü
| Döngü adımı | Sıcaklık | Zaman | Döngüler |
| dU içeren şablon bozulması | 25°C | 10 dakika | 1 |
| UDG aktivasyonu, şablonun ilk denatürasyonu | 95°C | 5~10 dakika | 1 |
| Denatürasyon | 95°C | 10 saniye |
30-35 |
| Tavlama | 60°C | 20 saniye | |
| Eklenti | 72°C | 30 saniye/kb | |
| Son uzatma | 72°C | 5 dakika | 1 |
Not: 25°C'deki reaksiyon süresi, deneysel gereksinimlere göre 5-10 dakika içinde ayarlanabilir.
Notlar
1.UDG çoğu PCR reaksiyon tamponunda aktiftir.
2.Enzimler kullanıldığında bir buz kutusunda veya buz banyosunda saklanmalı ve kullanımdan hemen sonra -20°C'de saklanmalıdır.
3.Sağlığınızı ve güvenliğinizi sağlamak için lütfen laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi gerekli KKD'yi giyin!
