Rnase İnhibitörü (Gliserol içermez)
Fare RNaz inhibitörü, E.coli'den eksprese edilen ve saflaştırılan bir rekombinant fare RNaz inhibitörüdür.Kovalent olmayan bağlanma yoluyla RNase A, B veya C'ye 1:1 oranında bağlanır, böylece üç enzimin aktivitesini inhibe eder ve RNA'yı bozulmadan korur.Ancak Aspergillus kaynaklı RNaz 1, RNaz T1, S1 Nükleaz, RNaz H veya RNaz'a karşı etkili değildir.Murin RNaz inhibitörü, RT-PCR, RT-qPCR ve IVT mRNA ile test edildi ve çeşitli ticari Ters transkriptazlar, DNA polimerazlar ve RNA polimerazlarla uyumluydu.
İnsan RNaz inhibitörleriyle karşılaştırıldığında, fare RNaz inhibitörü, inhibitörün etkisizleşmesine neden olan oksidasyona karşı oldukça duyarlı iki sistein içermez.Bu, onu düşük DTT konsantrasyonlarında (1 mM'den az) stabil hale getirir.Bu özellik, yüksek DTT konsantrasyonlarının reaksiyona ters olduğu reaksiyonlarda (örn. Gerçek zamanlı RT-PCR) kullanıma uygun hale getirir.
Auygulama
Bu ürün, RNA bozulmasını önlemek için RNaz müdahalesinin mümkün olduğu herhangi bir deneyde yaygın olarak kullanılabilir, örneğin:
1. Birinci iplikçikli cDNA sentezi, RT-PCR, RT-qPCR, vb.;
2. RNA'yı in vitro transkripsiyon/translasyonda bozulmadan koruyun (örn. in vitro viral replikasyon);
3.RNA izolasyonu ve saflaştırılması sırasında RNaz aktivitesinin inhibisyonu.
Depolama koşulları
-25~-15°C'de saklayın;
Donma-çözülme döngüleri ≤ 5 kez;
1 yıl geçerlidir.
Birim tanımı
Bir birim, 5 ng RNaz A'nın aktivitesini %50 oranında inhibe etmek için gereken RNaz İnhibitörünün miktarı olarak tanımlanır.
Moleküler ağırlık
RNaz İnhibitörü (Gliserol içermeyen) 50 kDa'lık bir proteindir.
Kalite kontrol
eksonükleaz Aktivite:
40 U enzimin 1 ug λ-Hind III sindirim DNA'sı ile 16 saat boyunca 37°C'de inkübasyonu, jel elektroforezi ile belirlendiği üzere DNA'da saptanabilir hiçbir bozunma ile sonuçlanmadı.
Endonükleaz Aktivitesi:
40 U enzimin 1 μg λ DNA ile 16 saat boyunca 37°C'de inkübasyonu, jel elektroforezi ile belirlendiği gibi DNA'da saptanabilir bir bozulmayla sonuçlanmadı.
Nickleme Aktivite:
40 U enzimin 1 μg pBR322 ile 16 saat boyunca 37°C'de inkübasyonu, jel elektroforezi ile belirlendiği üzere DNA'da saptanabilir bir bozulma ile sonuçlanmadı.
RNaz Aktivite:
40 U enzimin 1,6 μg MS2 RNA ile 4 saat boyunca 37°C'de inkübasyonu, jel elektroforezi ile belirlendiği gibi RNA'da saptanabilir bir bozulma ile sonuçlanmadı.
E.koli DNA'sı:
TaqMan qPCR tarafından 40 U Enzim tespit edildi.E.coli DNA'sı ≤ 0, 1pg/40U'dur.
Nnots
1. Enzim inaktivasyonunu önlemek için şiddetli bir şekilde sallamayın veya karıştırmayın.
2.RNaz inhibitörü, 25°C ila 55°C arasındaki sıcaklıklarda aktiftir ve ≥65°C'de etkisiz hale gelir.
3. RNaz H, RNaz 1 ve RNaz T1'in aktivitesi inhibe edilmez.
4. RNaz aktivitesinin engellenmesine yönelik pH aralığı geniştir (pH 5-9'da aktif), pH 7-8'de maksimum aktivite sergiler.
